5.1.3.4接种器材5.1.3.4.1小口塑料瓶(20L聽)5.1.3.4.2聽Mallasez或修改的Neubauer血球计数器。聽聽所有玻璃器皿和塑料管都必须在使用后及洗涤前经高压消毒。用热的浓洗涤剂溶液清洁器材,然后将它们放到浓度最小为509聽/聽L的次氯酸钠溶液中,至少在室温浸泡30聽min。用蒸馏水冲洗器材,然后将其放到没有卵囊的环境中干燥。尽可能使用一次性物品。5.1.3.5试剂5.1.3.5.1超纯水5.1.3.5.2聽15Ommol/lPBS溶液(磷酸缓冲盐)A成分:聽NaCL聽聽聽聽聽聽聽聽聽8.5g聽Na2HPO4聽聽聽聽聽聽1.079聽Na2HPO4.2H2O聽0.39g加超纯水到1000ml聽B制法:用盐酸或氢氧化钠将pH调到7.2士0.1,在4℃聽可储存1个星期
5.1.3.5.3贾第鞭毛虫/隐袍子虫免疫磁分离(IMS)试剂盒A抗隐抱子虫单克隆抗体磁微粒;B抗贾第鞭毛虫单克隆抗体磁微粒;C聽10SL缓冲液A聽(15mL),透明无色;D聽10SL-M缓冲液B(loml),品红色。将免疫磁分离(IMS)试剂盒,4℃聽储存。5.1.3.5.4免疫荧光试剂盒抗隐抱子虫/贾第鞭毛虫单克隆抗体一异硫氰酸盐荧光素试剂盒(5mL聽),于4℃聽储存
5.1.3.5.5封固剂:2%DABCO/甘油。A成分:甘油/PBS缓冲盐溶液(60%/40%)聽100聽mL聽DABCO聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽2gB保存:室温条件下储存12个月。5.1.3.5.6聽1mol/LTris聽,聽pH7.4聽聽在1000聽mL超纯水中溶解132.29的TriS盐酸;然后再加19.49的TriS碱。用盐酸或氢氧化钠溶液将pH调到7.4士0.1。用孔径0.2um的滤膜将它过滤灭菌后,移到一个无菌的塑料容器中室温条件下储存6个月。5.1.3.5.7聽聽0.5mol/lNa2—EDTA聽,聽pH8.0。将37.22g乙二胺四乙酸二钠盐二水化合物(Na2一EDTA)溶解到200聽mL的超纯水中,然后用盐酸或氢氧化钠溶液将pH调到8.0士0.1,室温条件下储存6个月。5.1.3.5.8淘洗缓冲液。A聽Envirochek淘洗缓冲液:月桂醇聚醚12聽(聽Laureth一12聽)聽聽聽聽4g聽1mol/lTris聽,聽pH7.4聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽4Oml聽0.5mol/l聽聽Na2一EDTA聽,聽pH8.0聽聽聽聽聽8聽mL聽A型止泡剂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽600ul聽加超纯水到4000mL聽聽聽聽称取1g月桂醇聚醚12到玻璃烧杯中,然后加100聽mL超纯水。用电炉或微波炉将烧杯加热,使月桂醇聚醚一论溶解,然后再将其转移到1聽000聽ml有刻度的量筒中。用超纯水将烧杯冲洗几次,确保所有的洗涤剂都转移到量筒中。加10mLpH为7.4的TriS溶液;2mLpH为8.0的Na2一EDTA溶液和150ulA型止泡剂最后用超纯水稀释到1000mL。室温条件下储存l个月。聽B聽FiltaMax淘洗缓冲液(PBST缓冲液):聽Na2HPO4聽聽聽聽聽聽1.44g聽KH2PO4聽聽聽聽聽聽聽0.24g聽KCl聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.2g聽NaCI聽聽聽聽聽聽聽聽聽8g非离子表面活性剂Tween-20聽聽聽聽0.1mL超纯水聽聽聽聽聽聽聽聽900mL将1.44g磷酸氢二钠、O.24g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾及89氯化钠加人900mL超纯水,搅拌20聽min至完全溶解,加人0.lm工非离子表面活性剂Tween20并继续搅拌10min,然后用超纯水稀释至1聽000聽ml.。C、FiltaMaxPress决速法淘洗缓冲液(PETT缓冲液):焦磷酸四钠聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.29EDTA柠檬酸三钠聽聽聽聽聽聽0.39聽Tris一HCI聽(1mol/l)聽10聽mL聽Tween8O聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.1聽mL将0.2g焦磷酸四钠和0.3gEDTA柠檬酸三钠加人900ml,超纯水,搅拌10min使之完全混合。然后加人10聽mL聽1.0mol/L聽TrisHCI并搅拌5min使之混合。再加人0.1聽ml聽Tweenso并搅拌10min混合(Tween80粘度高,吸取时务必注意)。最后用超纯水稀释至1000mL,并调节pH至7.4士0.2聽5.1.3.5.9聽聽聽0.1mol/l盐酸溶液。5.1.3.5.10聽聽聽lmol/L氢氧化钠溶液5.1.3.5.11聽聽聽纯甲醇。5.1.3.5.12聽聽聽聽DAPJ储存溶液:在一个含有1mg4,6一二氨基一2苯基引噪(DAPI)的烧瓶中,注人500川的纯甲醇(2mg/l)。4℃聽暗处储存15天。5.1.3.5.13聽聽聽聽DAPI染色溶液:用50mLPBS稀释10ulDAPI母液每日配制并将它储存在暗的4℃环境中。5.1.3.5.14聽聽50g/L的次氯酸钠溶液。5.1.3.5.15聽碱胜洗涤剂5.13.5.16聽纯的Giar山alalnbl血抱囊:浓度为100个袍囊/ml,能在4℃聽储存2个月。
5.1.3.5.17聽纯的Cryptoporidium聽paruuum卵囊:浓度为100个卵囊/mL,能在4℃聽储存2个月
注:对于储存了2个月以上的卵囊存储液.可以在对其浓度和荧光的强度检查之后继续使用聽聽聽
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