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      BP培养基经不同条件贮存后对金黄色葡萄球菌检测结果的影响



      录入时间:2010-9-14 15:09:36 来源:中国卫生检验杂志

      国标中规定,BP培养基(BP皿)制备后于冰箱内保存48h内使用,而在实际工作中较难做到,由于工作量不确定,配制量很难掌握,而且要频繁的制备,给工作带来不便,为保证工作质量,提高工作效率,减少浪费,我们经不同温度、时间贮存后的BP平皿对金黄色葡萄球菌检测效果进行了实验观察,现将结果报告如下:聽
      1 材料与方法
      1.1材料
      BP干燥培养基由北京陆桥技术有限公司生产,金黄色葡萄球菌( 25923) 由ATCC提供。聽
      1.2 方法
      实验用菌株接种肉汤培养复苏后备用,在测定时进行10倍递增稀释,使每ml细菌在2000个左右,将按常规法配制倾注的BP皿,放入平皿筒中放冰箱( 4℃-8℃) 简称“冰筒”、聽 放入平皿筒中放室温(4℃-8℃)简称“室筒”、直接放冰箱 (4℃-8℃)简称“冰散”和直接放室温(4℃-8℃)简称“室散”贮存,对经上述条件不同时间贮存后的BP平皿,分别用微量加样器每皿加入0.1ml金黄色葡萄球菌菌液,密划,经37℃培养24h,观察金黄色葡萄球菌的菌落大小、色泽等,并计数菌落数(分别接种5块平皿取平均数);将BP培养基配制于三角瓶中(不倾注平皿),放冰箱(4℃-8℃)保存不同时间后,再进行溶解,倾注平皿后用微量加样器每皿加入0.1ml金黄色葡萄球菌菌液,密划,经37℃培养24h,观察菌落生长情况并计数菌落数(分别接种5块平皿取平均数)。对照用BP培养基及菌液均系当天配制及稀释。聽
      2 结果
      2.1聽聽 BP平皿经不同条件贮存后金黄色葡萄球菌检测结果
      BP平皿置冰箱、室温后在不同时间内接种金黄色葡萄球菌,置37℃培养24h后计数菌落数, 结果见表 1 。聽
      2.2聽 BP培养基在冰箱中贮存不同时间后金黄色葡萄球菌检测结果
      BP培养基配制后于三角瓶中放置,经贮存不同时间后倾注BP平皿,然后接种金黄色葡萄球菌,置37℃培养24h后计数菌落数,结果见表2 。聽
      表 1聽 BP平板经不同条件贮存后金黄色葡萄球菌检测结果
      BP平板贮存时间(d)
      金黄色葡萄球菌检出数
      对照
      冰筒(%)
      冰散(%)
      室筒(%)
      室散(%)
      当天
      202
      203(100.5)
      202(100.0)
      1
      198
      198(100.0)
      197(99.5)
      197(99.5)
      195(98.5)
      2
      213
      213(100.0)
      212(99.5)
      204(95.8)
      190(89.2)
      3
      208
      207(99.5)
      204(98.1)
      186(89.4)
      164(78.8)
      4
      212
      210(99.1)
      205(96.7)
      158(74.5)
      147(69.3)
      5
      205
      201(98.0)
      194(94.6)
      127(62.0)
      106(51.7)
      6
      210
      204(97.1)
      195(92.9)
      110(52.4)
      84(40.0)
      7
      207
      197(95.2)
      187(90.3)
      88(42.5)
      60(29.0)
      10
      203
      170(83.7)
      150(73.9)
      42(20.7)
      21(10.3)
      14
      200
      141(70.5)
      120(60.0)
      19(9.5)
      7(3.5)
      21
      201
      88(43.8)
      59(29.4)
      3(1.5)
      1(0.5)
      表2聽 B P培养基在冰箱中贮存不同时间后金黄色葡萄球菌检测结果
      BP培养基贮存时间(d)
      金黄色葡萄球菌检出数
      对照
      检出数(%)
      5
      205
      204(99.5)
      10
      203
      202(99.5)
      15
      212
      210(99.1)
      20
      199
      196(98.5)
      25
      208
      200(96.2)
      30
      204
      194(95.1)
      3 讨论
      实验结果表明,倾注平皿后的BP培养基放置平皿筒中置冰箱(4℃-8℃) 条件下贮存和直接放冰箱(4℃-8℃) 条件下贮存,前者贮存4d,对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达99%以上),贮存7d,检出率仍达95.2%,贮存10 d,检出率明显下降至83.7%;而后者贮存2d,对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达99%以),贮存7 d,检出率下降至90.3%,这一结果与国标法规定BP培养基在倾注平皿后宜在当天使用或冰箱48h内使用的观点趋向一致,而前者的结果比国标规定的使用时间延长了许多,说明B P平皿在冰箱贮存时包装的重要性。由于国标法规定在冰箱内贮存未指明BP平皿的包装条件,因此可理解为在无外包装条件下直接放置。本次结果也基本上印证了这一点。把BP平皿放入平皿筒( 没有的也可用纸包起来再套上塑料袋)中贮存,可能减少了培养基中有效成份的挥发,从而延长了保存期。而将倾注平皿后的B P培养基放置平皿筒中置室温( 18℃-22℃)条件下贮存和直接放室温(18℃-22℃) 条件下贮存, 前者贮存1 d后对金黄色葡萄球菌的检测效果无影响(检出率达9 9%以上),贮存2d后,检出率下降至95. 8%,贮存3 d后检出率更是下降至89.4 %,而后者贮存1d后检出率达到98.5%,贮存2 d后就明显下降至89.2%。从第2天起,放室温的检出率明显低于放冰箱的,这可能是因为在室温贮存温度较高,湿度也不好控制,使培养基中的水分和有效成份挥发的较快,从而影响了保存期。说明这种方法贮存BP平皿是不可取的。聽
      将BP培养基配制于三角瓶中放冰箱( 4℃-8℃) 贮存,临用时加热溶解倾注平皿,贮存至30d后,金黄色葡萄球菌的检出率仍达到95.1%,这一结果表明,影响金黄色葡萄球菌检出率主要是由于BP平皿表面有效成份的挥发。因此控制有效 成份从表面挥发是适当延长 B P平皿保存期的主要关键,最简单的方法就是用三角瓶配制好后贮存于冰箱中( 4℃-8℃),聽 临用时加热溶解倾注平皿,即省事又减少浪费。聽
      通过本次调查,发现完全可以延长BP培养基的保存时间,BP平皿放平皿筒中( 或用纸包严后套上塑料袋) ,于冰箱( 4℃-8℃)内可贮存7 d左右。配制在三角瓶中于冰箱内( 4℃-8℃)可贮存至30 d 。另外贮存的BP平皿应适当倒得厚一些,以免倒薄了时间长了发生干裂, 影响试验结果。聽

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