聽聽聽
聽　　　　　　　　　　　　　　微生物检测的各种培养基聽
聽
名称聽用途聽
1聽革兰氏染色液聽微生物染色聽
2聽营养琼脂聽细菌培养和细菌总数测定聽
3聽孟加拉红培养基聽霉菌、酵母菌计数聽
4聽乳糖胆盐发酵管聽大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定聽
5聽乳糖发酵管聽供大肠菌群证实试验用聽
6聽三糖铁琼脂聽肠杆菌科细菌的生化反应筛选聽
7聽伊红美兰琼脂聽分离肠道致病菌聽
8聽缓冲蛋白胨水聽沙门氏菌检验中的前增菌聽
9聽四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液聽沙门氏菌检验中的前增菌聽
10聽GN增菌液聽志贺氏菌的前增菌聽
11聽亚硒酸盐胱氨酸增菌液聽沙门氏菌选择性增菌培养聽
12聽SS琼脂聽沙门氏菌、志贺氏菌的分离聽
13聽V-P半固体琼脂聽细菌检验的V-P试验聽
14聽7.5%氯化钠肉汤聽金黄色葡萄球菌的增菌培养聽
15聽Baird-Parker培养基聽金黄色葡萄球菌的检验聽
16聽酸性肉汤聽酸性罐头食品商业无菌检验聽
17聽尿素琼脂基础聽细菌检验中的尿素酶试验聽
18聽赖氨酸脱羧酶培养基聽细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验聽
19聽吲哚培养基聽细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤聽
20聽硝酸盐氰化钾培养基聽细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验聽
21聽生理盐水聽检样的溶解与稀释聽
1革兰氏染色法聽
1.1革兰氏染色液
1.1.1结晶紫染色液
成份：聽结晶紫聽1.0g
95%乙醇聽20.0ml
1%草酸铵水溶液聽80.0ml
1.1.2革兰氏碘液
成份：聽碘聽1.0g
碘化钾聽2.0g
蒸馏水聽300.0ml
1.1.3聽95%乙醇
1.1.4沙黄复染液聽
成份：聽沙黄聽0.25g
95%乙醇聽10.0ml
蒸馏水聽90.0ml聽
1.2染色法
1.2.1将涂片在火焰上固定。
1.2.2初染：滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
1.2.3媒染：滴加革兰氏碘液，作用1聽min，水洗。
1.2.4脱色：滴加95%乙醇脱色，水洗；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗。
1.2.5复染：滴加沙黄复染液，染1min，水洗，待干，镜检。
1.2.6结果判定：革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。
2一般培养基和专用培养基
2.1营养琼脂
2.1.1用途：用于一般细菌培养及细菌总数测定。
2.2.2成份（g/L）：
蛋白胨聽10.0
牛肉粉聽3.0
氯化钠聽5.0
琼脂聽15.0
PH7.3±0.1
5.2.2.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃15聽min高压灭菌备用。
5.2.2.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。

2.2孟加拉红培养基
2.2.1用途：用于粮食、食品、饮料中霉菌、酵母菌计数。
2.2.2成份（g/L）：
蛋白胨聽5.0
葡萄糖聽10.0
磷酸二氢钾聽1.0
硫酸镁聽0.5
孟加拉红聽0.03
氯霉菌聽0.1
琼脂聽15.0
2.2.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20聽min高压灭菌备用。
2.2.4注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
2.3乳糖胆盐发酵管
2.3.1用途：用于大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定。
2.3.2成份（g/L）：
蛋白胨聽20.0
胆盐聽3.0
乳糖聽5.0
溴甲酚紫聽0.01
PH7.4±0.1
2.3.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，115℃15min高压灭菌，双料乳糖胆盐发酵管除纯水外，其它成份加倍。
2.3.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.4乳糖复发酵管
2.4.1用途：供大肠菌群证实试验用。
2.4.2成份（g/L）：
蛋白胨聽20.0
乳糖聽10.0
溴甲酚紫聽0.01
PH7.4±0.1
2.4.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装10ml于有倒立发酵管的试管中，115℃15min高压灭菌备用。
2.4.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.5三糖铁琼脂
2.5.1用途：主要用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选。
2.5.2成份（g/L）：
蛋白胨聽20.0聽酚红聽0.025
牛肉膏聽3.0聽氯化钠聽5.0聽
乳糖聽10.0聽硫酸亚铁铵(6H2O)聽0.5
蔗糖聽10.0聽硫代硫酸钠聽0.5
琼脂聽12.0聽葡萄糖聽1.0
PH7.4±0.1
2.5.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，115℃15min高压灭菌制成高层斜面备用。
2.5.4注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。
2.6伊红美兰琼脂
2.6.1用途：弱选择性培养基，用于分离肠道致病菌。
2.6.2成份（g/L）：
蛋白胨聽10.0
乳糖聽10.0
磷酸氢二钾聽2.0
琼脂聽15.0
伊红聽0.4
美兰聽0.065
PH7.1±0.2
2.6.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热溶解，121℃15min高压灭菌，冷至55℃倾注平板备用。
2.6.4注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。
实施纠正措施
2.7缓冲蛋白胨水
2.7.1用途：用于沙门氏菌检验中的前增菌。
2.7.2成份（g/L）：
蛋白胨聽10.0
氯化钠聽5.0
Na2HPO4(12H2O)聽9.0
KH2PO4聽1.5
最终PH7.2±0.1
2.7.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每瓶225ml，121℃15min高压灭菌备用。
2.7.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.8四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液
2.8.1用途：用于沙门氏菌检验中前增菌。
2.8.2成份（g/L）：
A基础培养基
多胨或胨聽5.0g
胆盐聽1.0g
碳酸钙聽10.0g
硫代硫酸钠聽30.0g
蒸馏水聽1000ml
B碘溶液
碘聽5.0g
碘化钾聽6.0g
蒸馏水聽20ml
2.8.3制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100聽ml。分装时应随时震荡，使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用，临用时每100聽ml基础培养基中加入碘溶液2聽ml、0.1%煌绿溶液1聽ml。
5.2.8.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.9GN增菌液聽
2.9.1用途：用于志贺氏菌的前增菌液
2.9.2成份（g/L）：
胰蛋白胨聽20.0聽g
葡萄糖聽1.0聽g
甘露醇聽2.0聽g
柠檬酸钠聽5.0聽g
去氧胆酸钠聽0.5聽g
磷酸氢二钾聽4.0聽g
磷酸二氢钾聽1.5聽g
氯化钠聽5.0聽g
蒸馏水聽1000ml
2.9.3制法:按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225聽ml，115℃高压灭菌15min。
2.9.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.10亚硒酸盐胱氨酸增菌液
2.10.1用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养。
2.10.2成份（g/L）：
蛋白胨聽5.0
乳糖聽4.0
磷酸氢二钠聽10.0
亚硒酸氢钠聽4.0
L-胱氨酸聽0.1
PH7.0±0.1
2.10.3制法:聽称取各成份溶于灭菌纯水中，在无菌容器中溶解，分装，每瓶100ml，备用。
2.10.4注意事项：于4℃冰箱中密封保存。

2.11聽SS琼脂
2.11.1用途：用于沙门氏菌、志贺氏菌的分离。聽2.11.2成份（g/L）：
蛋白胨聽5.0聽牛肉粉聽5.0
乳糖聽10.0聽三号胆盐聽3.5聽
柠檬酸铁聽10.0聽柠檬酸钠聽8.5聽
中性红聽0.025聽硫代硫酸钠聽8.5
琼脂聽15.0聽煌绿聽0.00033
PH7.0±0.1
2.11.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸溶解，冷至55℃，倾注平板备用。
2.11.4注意事项：A保存于阴凉干燥处，密封、避光。
B勿高压灭菌。
2.12V-P半固体琼脂
2.12.1用途：用于细菌检验的V-P试验。
2.12.2成份（g/L）：
蛋白胨聽12.0聽
酵母膏聽1.0聽
葡萄糖聽10.0
氯化钠聽5.0聽
琼脂聽3.0聽
PH7.3±0.1
2.12.3制法:聽称取各成份于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，每管1～1.5ml，121℃10min高压灭菌，立即取出冷却备用。
2.12.4配制试剂：
甲液：聽α-萘酚聽6.0g
无水乙醇溶液聽100.0ml
乙液：聽氢氧化钾聽40.0g
肌酸聽0.3g
蒸馏水聽100.0ml
先将氢氧化钾溶于水中，再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4℃冰箱内，可使用2个月。
2.12.5试验方法：挑取琼脂培养物接种V-P培养基中，于36±1℃培养24h±2h，将甲液0.2ml（约6滴）加入试管中，摇混均匀，再加入乙酸0.1ml（约3滴），再摇混均匀。
阳性反应立即或15min内呈现红色，阴性反应为铜色。阴性结果在1h后再做一次检查。有些试管在数小时后红色会逐渐消失，此仍作阳性反应。
2.12.6注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。
2.13聽7.5%氯化钠肉汤
2.13.1用途：用于金黄色葡萄球菌的增菌培养。
2.13.2成份（g/L）：聽蛋白胨聽10.0聽
牛肉粉聽3.0聽
氯化钠聽75.0聽
PH7.4±0.1
2.13.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每瓶50ml，121℃15min高压灭菌备用。
5.2.13.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。
2.14聽Baird-Parker培养基
2.14.1用途：用于食品中金黄色葡萄球菌的检验。
2.14.2成份（g/L）：
胰蛋白胨聽10.0聽丙酮酸钠聽10.0
牛肉膏聽5.0聽甘氨酸聽12.0
酵母膏聽1.0聽氯化锂(6H2O)聽5.0聽
琼脂聽20.0聽PH7.4±0.1
2.14.3用法:聽称取各成份于纯水中，加热煮沸至溶解，分装每瓶95ml，121℃15min高压灭菌，冷至50℃时，每95ml加入5ml亚碲酸钾卵黄增菌液。
5.2.14.4注意事项：A保存于阴凉干燥处，密封、避光。
B平板冰箱贮存不超过48小时。
2.15酸性肉汤
2.15.1用途：用于酸性罐头食品商业无菌检验。
2.15.2成份（g/L）：
多价蛋白胨聽5.0
酵母粉聽5.0聽
葡萄糖聽5.0
磷酸氢二钾聽4.0
PH5.0±0.2聽
2.15.3制法:聽称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20聽min高压灭菌备用。
2.15.4注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3生化试验培养基和试剂
3.1尿素琼脂基础聽
3.1.1用途：用于细菌检验中的尿素酶试验。
3.1.2成份（g/L）：
蛋白胨聽1.0
葡萄糖聽1.0
氯化钠聽5.0
磷酸二氢钾聽2.0
酚红聽0.012
琼脂聽15.0
PH6.8±0.1
3.1.3制法:聽称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌，冷至55℃以无菌技术每95ml溶液加入40%尿素水溶液5ml，混匀后制成斜面备用。聽3.1.4试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果。尿素酶阳性者出于产碱而使培养基变为红色。
3.1.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3.2赖氨酸脱羧酶培养基
3.2.1用途：用于细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验。
3.2.2成份（g/L）：
酵母膏聽3.0
葡萄糖聽1.0
L-赖氨酸聽5.0
溴甲酚紫聽0.016
PH6.7±0.1
3.2.3制法:聽称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管，每管1-1.5ml，121℃15min高压灭菌备用。聽3.2.4试验方法：从琼脂斜面上挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养18-24h，观察结果。赖氨酸脱羧酶阳性者出于产碱而使培养基变为紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变黄色。对照管应为黄色。
3.2.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3.3吲哚培养基
3.3.1用途：用于细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤。
3.3.2成份（g/L）：
蛋白胨聽10.0
氯化钠聽5.0
DL-色氨酸聽1.0
PH7.4±0.1
3.3.3用法:聽称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌备用。
3.3.4配制柯凡克试剂：对二甲氨基苯甲醛聽10.0g
戊醇聽150.0ml
浓盐酸聽50.0ml
将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中，缓慢搅拌加入盐酸，加热至60℃，呈深黄色，静置6-7h，变成黄色即可使用。试剂宜少量配制，不用时保存于4℃冰箱内。久存后试液变成褐色不可使用。
3.3.5试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，滴加柯凡克试剂0.1ml。阳性反应出现红色环；阴性反应为黄色环。
5.3.3.6注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3.4硝酸盐氰化钾培养基
3.4.1用途：用于细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验。聽3.4.2成份（g/L）：
蛋白胨聽10.0
氯化钠聽5.0
磷酸二氢钾聽0.225
磷酸氢二钠聽5.64
硝酸钾（无亚硝酸盐）1.0
5g/L氰化钾溶液聽10.0
PH6.8±0.1
3.4.3用法:聽称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌，每100ml无菌加入0.5%氰化钾溶液1ml，分装无菌试管备用；同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
3.4.4试验方法：挑取琼脂培养物接种，先接种于吲哚培养基中，混匀，然后灼烧接种环，再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中，于36±1℃培养24h，观察培养液有无混浊，培养液出现混浊，即有细菌生长，为阳性反应（不抑制）；经2天培养，细菌不生长为阴性反应（抑制）。
3.4.5注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。
3.5生理盐水
3.5.1用途：用于检样的溶解与稀释。
3.5.2成份：（g/L）：
氯化钠聽8.5g
纯水聽1000.0ml
3.5.3制法：称取氯化钠于纯水中，至完全溶解，分装，121℃高压灭菌15min。
聽

聽

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