聽 聽
一、药敏试验目的
聽 选择治疗药物
聽 鉴定细菌
聽 流行病学的调查
聽 耐药菌株的监测
聽 注意：敏感度可预测的菌，常驻菌、污染菌、不应做药敏试验

二、敏感和耐药的定义
聽 敏感：常用药量愈期有效 MIC低于抗菌药物治疗浓度的下限
聽 耐药：常用药量愈期无效 MIC高于抗菌药物治疗浓度的上限
聽 人体血清内抗菌药物浓度与不同菌株MIC的关系
聽 1、敏感与耐药的分界根据药理学和抗菌药物MIC而定
聽 2、不同药物对不同细菌的分界点不一致
聽 3、敏感与耐药是在一定条件下的相对概念

三、方法学介绍：原理、方法、结果判断、报告方式
（一）稀释法：
聽 1、试管法 液体稀释法 P104 〈定量〉
聽 2、平皿法 固体稀释法 P106
（二）扩散法：常用方法 P100 〈定性〉
（三）stokes法
聽 1、稀释法，平皿的优点：可同时接种多个菌
聽 可发现混合菌株
聽 可观察接种物的生长善状况
聽 测待测菌同时必须做对照菌株的参照
聽 目的：监测菌株生长环境及试验条件
聽 稀释法三步骤：标准 测试 判断
聽 报告方式：直接报MIC，是敏感还是耐药
聽 MIC，结合血清或体液中抗菌药物浓度，判断是敏聽
聽 感还是耐药
聽 2、扩散法：方法 P101
聽 测被测菌同时须做质控菌株的参照，以监测试验条件是否合格
聽 步骤：标准 测试 结果判断
聽 影响因素及其引起常见错误差的原因：P103
聽 1）影响结果的主要因素
聽 培养基：A厚度4mm， B拮抗物，C Ca2+ .Mg2+ 浓度
聽 被检菌接种量（浓度）：0.5麦氏比浊管 （1.5亿/ mL）
聽 活菌
聽 含药纸片：A 药量 B 抗菌活性
聽 2）注意事项
聽 纸片距平板边缘15mm，各纸片中心相距24mm
聽 实验室试验条件经标准菌株监测稳定后，不要轻易变动
聽 扩散慢的药物（ex：多粘菌素，磺胺等），S可报告，R聽
聽 可稀释法重做，以免出现假耐药聽
聽 生长慢的细菌不适合做扩散（ex草绿色链球菌）
聽 药敏试验不能在CO2 缸内孵育 CO2+H2O脮 H2 CO3 影响PH
聽 °结果读取法 NCCLS标准
聽 ±中度敏感为缓冲地带一般不报告聽
聽 A：为了避免误差〈中介度〉
聽 聽B：加大剂量或患病部位聽
聽 比血清的血药浓度高
聽 可应用
聽 聽 1、混合菌生长
聽 聽 2、可能是变形杆菌
聽 聽 3、药物扩散慢
聽 有高度耐药菌杆株出现
聽 药物选择性压力à敏感菌株，耐药菌株，药物
聽 逐渐无效
聽 粘质沙雷出现，双环现象报R
聽 3、stokes法：
聽 外圈，接种敏感的质控菌
聽 里圈，接种被检菌
聽 两菌交接处贴合抗菌素的纸片，35°C孵育16-18h
聽 优点：抵消琼脂间的误差
聽 抵消纸片的误差
聽 用自身对比来判断结果，抵消结果判断的误差聽
聽 敏感N-3
聽 中介度N-3>c>3
聽 耐药c拢3
聽 注：S和R分界点的判断表：
聽 适用绝大多数需氧菌和兼性厌氧菌
聽 基本适用链球菌、嗜血杆菌、淋球菌
聽 扩散法不适用于厌氧菌
聽 稀释法和扩散法的比较

稀释法 扩散法
聽
聽 菌株MIC 直接测出 间接测出
聽 操作方法 繁 简单
聽 用于扩散慢的抗菌药 适合 不适合
聽 用于生长慢的菌 适合 不适合
聽 测出值 倍比 连续
聽
聽 绝对扩散法和比较扩散法的对比
聽 绝对扩散法 比较扩散法
聽
聽 敏感和耐药的 NCCLS标准或厂商指定 用NCTC标准菌株做聽
聽 分界点 固定的分界点 扩散法后，算出分界点聽
聽 根据实验的条件而波动
聽 对药敏试验的 要求严格，必须按NCCLS 不太严格，试验条件波动聽
聽 要求条件 或厂商指定的纸片含药量 对结果影响较小，可由实
聽 规定的培养基等试验条件 验室自行配制培养基和选聽
聽 才能使用分界点表，否则 择试验条件影响结果
聽
聽 耐药菌株产生了各种破坏抗生素的钝化酶
聽
聽 耐药菌 钝化酶
聽
聽 青霉素 葡萄球菌，G- 杆菌 脽内酰胺酶，酰胺酶聽
聽 头孢菌素 G- 杆菌 头孢菌素内酰胺酶
聽 链霉素 G- 杆菌 链霉素磷酸转移酶，链霉素
聽 腺苷转移酶
聽 卡那霉素 G- 杆菌，绿脓杆菌 卡那霉素磷酸转移酶，卡那
聽 霉素已酰转移酶，卡那霉素
聽 腺苷转移酶
聽
聽 4、测内酰胺酶P115
聽 1）微生物法：培养基上涂对青霉素菌株，贴1U青霉素纸片
聽 划上一个不含内酰胺酶的菌株作阳性对照内酰胺酶菌株处有
聽 35°C孵育16-18h （-）圆形抑菌环 （+）抑菌环在含内酰胺酶菌株处有凹陷
聽 2）快速方法：产色头孢菌素法
聽 测酸的方法
聽 测碘的方法 青霉素酸争夺碘 绝à无色
聽 临床意义：
聽 微生物法普遍适用。准确，简便，费时，是参考方法
聽 产色头孢菌素法：对葡萄球菌，淋球菌，嗜血杆菌，肠球菌，卡他布聽
聽 兰汉氏菌适用。
聽 产酸：对肠球菌，卡他布兰汉不适用。
聽 产碘：对淋球菌适用
聽 说明：对肠杆菌科，假单胞菌，其他G-需氧菌测内酰胺酶无意义。因其结果不能说明常用的内酰胺类药物对该菌的敏感性。
聽 为了说明准确测出葡萄球菌是否产生内酰胺酶应用诱导酶法（1ug/片）Ｏxicillin纸片抑菌带边缘取菌做试验。

四、联合药敏试验聽
聽 1、适应症：病原菌不明的感染
聽 单一药物不能控制的混合感染
聽 全身性绿脓杆菌感染
聽 药物不易渗入部位eg:cns.csf
聽 长期用药可能产生耐药的感染 eg:结核，慢性骨髓炎
聽 病原菌为多耐药菌株
聽 2、方法学：
聽 1）扩散法： P107 图12-3
聽 Q联合用药选择协同作用或累加作用
聽 2）稀释法 棋盘法P108
聽 结果报告：组合药物对被检菌有效的最低浓度
聽 选择原则：组合的药物浓度比对被检菌有效，距中毒浓度又较远。
聽 3）联合用药杀菌试验

五、血清中抗菌浓度测定
聽 1、目的：有效治疗
聽 血药浓度
聽 计算抑菌商数IQ=----------------
聽 MIC
聽 2、适应药物及对象，治疗浓度和中毒浓度接近的药
聽 P111 心肝肾功受损者
聽 需大剂量治疗者
聽 对抗菌药利用差者
聽 选择投药时间 使血药量维持在有效量
聽 3、血药浓度测定：试管 抗菌素倍比稀释 MIC.8mg/ml
聽 血清倍比稀释 MIC 1/4血清
聽 血药浓度32ug/ml
聽 单
聽 血：
聽 已知抗菌素稀释成4个A、B、C、D，对称贴纸片
聽 x:未和血清抗菌素含量
聽 Q对数值（log2）间隔一样Q可用方格纸代替对数坐标纸做图可通过做好的图，查出X的浓度
聽 血浓度报告单需知项目：
聽 药物名称，给药途径，给药剂量、未 次给药时间（峰值取标本），标本名称，采药时间，血清治疗浓度，血清中毒
聽 浓度，血清血药浓度。

六、细菌耐药性扩散及实验室监测：
聽 耐药：天药耐药，获得性耐药（用药不当造成）适用突变，药物选择性压力聽

聽

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