2聽材料和方法
2.1材料
2.1.1菌株来源
嗜酸乳杆菌聽（Lactobacillus聽acidophilus），代号为ATCC4356；La-IM1、La-IM2聽和La-IM3聽分离自内蒙古传统发酵乳制品。
2.1.2仪器设备
紫外分光光度计、光学显微镜聽（OLMPUS聽）、梅特勒—托利多Delta320pH聽计、电热手提式压力蒸汽灭菌器、恒温培养箱、超净工作台等。
2.1.3培养基
RS培养基[9]:5g/L酵母提取物，10g/L蛋白胨，10g/L牛肉膏，20g/L葡萄糖，2g/L聽K聽HPO聽，2g/L柠檬酸二铵，5g/L聽乙酸钠，0.58g/L聽MgSO聽.7H2O聽，0.25g/L聽MnSO聽.4H2O,聽调pH6.2～6.4，固体需加15g/L琼脂粉，121℃灭菌15min。
2.2方法
2.2.1菌种的活化与分纯
用接种环挑取少量冷冻干燥保藏的菌粉，接种于液体MRS聽培养基中37℃，24h培养，连续传代两次进行活化；将活化后的菌种于MRS聽固体培养基上划线培养，37℃，48h聽培养；挑取半个单菌落染色镜检，如果镜检未发现杂菌，则用接种环挑取另外半个单菌落接种于液体MRS聽培养基中培养并保存备用；如果镜检发现杂菌，则用接种环挑取单菌落于MRS聽固体培养基上划线培养，再镜检，直至分纯。
2.2.2聽4株菌酸耐受性的实验
将4聽株嗜酸乳杆菌以3%聽的接种量接种于MRS聽液体培养基中进行传代一次。用盐酸调节MRS聽液体培养基的pH聽值为2.5，吸取4.5mL聽于4聽个试管中，置于高压灭菌锅内进行121℃、15min灭菌。按照聽10%的添加量吸取500聽μL菌液分别加入到4个试管中作用3h。作用结束后，将试管在漩涡混匀器上进行震荡混匀，平板涂布进行活菌计数。聽
2.2.3嗜酸乳杆菌La-IM2生长曲线的测定
将嗜酸乳杆菌La-IM2聽按3％的接种量，接种到装有300mL液体培养基的锥形瓶中，37℃进行培养。每隔2h在无菌超静工作台中取出20mL聽用于测OD600聽和pH聽值，直至24h，然后绘制生长曲线。聽
2.2.4嗜酸乳杆菌La-IM2在不同pH值条件下的酸耐受性实验
用盐酸调节PBS缓冲液的pH值分别为聽1.5、2.5、3.5、4.5、7，然后将嗜酸乳杆菌La-IM2聽按聽10％的接种量接种于以上pH聽值的PBS聽缓冲液中，在37℃下进行作用，作用时间分别为1.5h和3h，随后将试管在漩涡混匀器上进行震荡混匀，平板涂布进行活菌计数。聽
2.2.5活菌计数方法聽
每个样品取3聽个平行，用PBS聽缓冲液聽（pH聽聽7）逐步稀释5个梯度。以MRS聽固体培养基为计数培养基，于37℃培养48～72h后平板计数[10]，选择平板上菌落数在30～300个菌落的平板，统计菌落数，最后求取平均值。聽聽聽聽
聽聽聽

聽

上一篇：嗜酸乳杆菌酸耐受性的研究_1

下一篇：嗜酸乳杆菌酸耐受性的研究_3