一 范围
聽聽聽 本方法规定了动物源性食品中四环素类、沙星类高效液相色谱的快速测定方法。聽
聽聽聽聽本方法适用于动物源性食品中四环素类、沙星类高效液相色谱的快速测定。

二 方法

聽聽聽 2.1聽聽原理
聽聽聽 试样中的残留物经四环素类、沙星类快速检测前处理试剂盒处理，样液经四环素类专用层析柱净化、浓缩用高效液相色谱检测，外标法定量。
聽
聽聽聽 2.2聽聽试剂和材料
聽聽聽 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。
聽聽聽 2.2.1聽聽乙腈：色谱纯。
聽聽聽 2.2.2聽聽甲醇：色谱纯。聽
聽聽聽聽2.2.3聽聽三乙胺（分析纯）
聽聽聽 2.2.4聽聽磷酸（85%）（分析纯）
聽聽聽 2.2.5聽聽磷酸氢二钠:优级纯。
聽聽聽 2.2.6聽聽乙二胺四乙酸二钠。
聽聽聽 2.2.7聽聽柠檬酸：分析纯。
聽聽聽 2.2.8聽聽磷酸氢二钠溶液:0.2mol/L。称取28.41g磷酸氢二钠,用水水溶解,定容至1000mL。
聽聽聽 2.2.9聽聽柠檬酸酸溶液:0.1mol/L。称取21.01g柠檬酸,用水溶解,定溶至1000mL。
聽聽聽 2.2.10聽聽Mcllvaine缓冲溶液:将1000mL0.1mol/L柠檬酸溶液与625mL0.1mol/L磷酸氢二钠溶液混合。
聽聽聽 2.2.11聽聽Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液:0.1mol/L。称取60.5g乙二胺四乙酸二钠放入1625mLMclllvaine缓冲溶液中,使其溶解,摇匀。
聽聽聽 2.2.12聽聽标准品:聽土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星纯度大于98聽%。
聽聽聽 2.2.13聽聽标准贮备溶液:分别称取土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星各10mg，用甲醇溶解并定溶于100聽mL棕色容量瓶中，配制成100聽碌g/mL的标准贮备液，置于-20℃保存，有效期三个月。
聽聽聽 2.2.14聽聽混合标准工作溶液:用流动相稀释标准贮备溶液，配制成土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星均为10聽碌g/mL的混合标准溶液。0～4℃避光保存。
聽聽聽 2.2.15聽聽四环素、沙星类快速检测前处理试剂盒*聽()。
聽聽聽 2.3聽聽仪器和设备
聽聽聽 2.3.1聽聽高效液相色谱仪：配紫外-可见光波长检测器。
聽聽聽 2.3.2聽聽匀浆机。
聽聽聽 2.3.3聽聽固相萃取机
聽聽聽 2.3.4聽聽离心机：4000聽r/min。
聽聽聽 2.3.5聽聽调速多用振荡器。
聽聽聽 2.3.6聽聽聚四氟乙烯离心管:聽2.5聽mL，50聽mL，具塞。
聽聽聽 2 .4聽聽样品制备
准确称取已捣碎的样品5.00聽g于50聽mL离心管中,先加入四环素、沙星类快速检测前处理试剂盒中的提取剂1*(液体20mL)，用调速多用振荡器150聽rpm振荡3聽min,，4000聽r/min离心5聽min，收集上清液；再加入提取剂2*(液体10ml)聽用调速多用振荡器150聽rpm振荡3聽min,4000聽r/min离心5聽min，合并上清液；取一半上清液加入四环素专用层析柱中(使用前依次用5mL甲醇、5mL缓冲液（2.2.11）激活)挤干，用0.80mL甲醇洗脱,收集洗脱液,用0.2mL乙酸铵缓冲液至1.0mL。供仪器测定。
聽聽聽 2.5聽测定
聽聽聽 2.5.1聽聽液相色谱条件
聽聽聽 a)聽色谱柱:聽聽聽C18柱，250聽mm×4聽mm(i.d.),粒度5碌m;
聽聽聽 b)聽流动相:聽聽0.05聽mol/L磷酸/三乙胺缓冲液（pH2.4）+乙腈(80+20,V/V);
聽聽聽 c)聽流速:聽聽聽聽聽1.0mL/min;
聽聽聽 d)聽柱温:聽聽聽聽聽室温;
聽聽聽 e)聽检测波长:聽四环素类紫外检测器360聽nm。沙星类聽紫外检测器310nm；荧光检测器激发波长280nm，发射波长450nm。
聽聽聽聽 f)聽进样量：50聽uL。聽
聽聽聽 2.5.2聽聽标准工作曲线绘制
移取各移取四环素类、沙星类混和标准液，用流动相稀释成20聽ng/mL、50聽ng/mL、250聽ng/mL、500聽ng/mL标准工作溶液。按液相色谱条件（3.5.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线，标准工作曲线范围：20.0~500聽ng/mL。聽聽
聽聽聽 2.5.3聽试样测定
聽聽聽用微量进样器准确吸取试样溶液（3.4），按液相色谱条件（3.5.1）进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积。聽
聽聽聽 2.6聽聽结果计算
聽聽聽 按式（1）分别计算供试样品中的四环素类、沙星类残留量。聽
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽
聽聽聽聽聽聽聽聽ω=聽聽聽2×ci×V/聽m聽聽聽聽聽　……聽(1)
聽聽聽聽聽聽 ω－水产品中四环素、沙星类残留量，ug/kg；
聽聽聽聽聽聽 ci聽－标准曲线上查出试样溶液中四环素、沙星类标准工作溶液的浓度，（ug/L）；
聽聽聽聽聽聽 v－最终定容体积数，mL；聽
聽聽聽聽聽聽聽2－换算常数；聽
聽聽聽聽聽聽聽m－供试试料样品重量，g。
聽聽聽聽 本方法分别计算四环素类、沙星类结果。聽
聽聽聽聽 2.7聽聽检测限
聽聽聽聽 本方法土霉素、四环素检测限为20ug/kg；金霉素、强力霉素的检测限为50ug/kg，沙星类为：5ug/kg聽
聽聽聽聽 2.8聽聽回收率
聽聽聽聽 本方法土霉素、四环素、金霉素、强力霉素回收率为:75%～85%；沙星类回收率为：75%～85%

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