各国细胞库支原体污染的统计表
国家 聽聽受支原体污染(%)聽聽报告年度
USA-FDA聽聽15聽聽1993(past 30 years)
USA-ATCC聽聽15-20聽聽1992
Japan-(IFO,RIKEN,JCR 80~30~22聽聽1981 1987-19931998
Germany-DSM聽聽36聽聽1990-1994
Argentina聽聽65聽聽1987
Israel聽聽32聽聽1986-1993
China聽聽95聽 聽1990
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造成支原体高污染率的原因为:聽
1.支原体size 0.1~0.8 um,无细胞壁,可透过一般过滤膜(0.22-0.45 um)聽
2.支原体污染时,没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化聽
3.过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式聽
4.细胞流通间缺乏品管,造成实验室间的相互污染聽
5.研究或操作人员忽略污染问题聽
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支原体污染了来源:聽
1.聽聽已受污染的细胞聽
2.聽聽操作人员的疏失聽
3.聽聽已受污染的培养基、血清聽
4.聽聽操作环境不良、实验器具不洁等聽
由于支原体为人体口腔中之正常菌丛,实验室之操作人员的污染亦可能为污染源,须十分注意。而万一细胞已受支原体污染时,最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃,以免污染其它洁净的细胞株。但是若是坚持要作去除支原体污染,有以下几种方法,只不过结果会与原始的细胞特性有差异。
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去除支原体污染:聽
1. 抗生素处理:BM-cyclin(Roche),MRA(mycoplasma removal agent,ICN),Ciprofloxcin(Bayer),Enrofloxacin(Bayer)聽
2. Nucleic acid metabolites:5-bromouracil,Hoechst 33258,bromodeoxyuridine聽
3. Anti-sera聽
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预防与控制方面可从以下各点加强注意:
聽设备方面:聽
1.聽聽使用已作支原体测试ok之细胞株聽
2.聽聽于另一隔离之区域操作未知是否有支原体污染之细胞聽
3.聽聽使用不添加抗生素的培养基培养细胞聽
聽检测方面:定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O有否被支原体污染。
聽实验操作人员之无菌观念与无菌操作技术之要求
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