①在不含抗生素的奶中按所需浓度加人青霉素溶液，使对照中抗生素浓度与测试的 检出限制水平一致。以此作为对照管兄外，检出限还取决于所用菌株的敏感性。使用 枯草芽孢杆菌时，对照管中培养基青霉素的含量为0.05单位/mL;使用嗜热脂昉芽孢杆 菌(热乳芽孢杆菌)吋，育霉素含量为0.02单位/mL,

②在40~50℃吋，将lmL处于指数生长期的营养肉汤培养物加人5mL熔化的营养 琼脂培养基中，然后倒人培养皿,置于橾作台上使之凝固，按要求标记底板。

③使用洁净干燥的镊子，将一片无菌空白抗生素纸片(直径13mm，Difco)浸入充分 混合的样品中，控掉多余奶液，将纸片放在平板中合适的位置，冲洗，擦干镊子，进行对照 和其他样品的测试。

④将平皿置于适当的培养温度（30℃培养枯草芽孢杆菌或50℃培养嗜热脂肪芽孢 杆菌）.直到生出菌落或培养至规定的时间。

⑤检查平板，将样品的抑菌圏直径与对照进行比较，当样品的抑菌圈直径小于对照 时,样品合袼；当样品的抑菌圈直径等于或大于对照抑菌圏直径吋，且经内酰胺酶处 理后样品的抑菌圈直径小于未用β-内酰胺酶处理的样品抑菌圏直径时，样品中含有 内酰胺类抗生素。当样品抑菌圏等于或大于对照时,用内酰胺处理后样品抑菌圏的 大小不变,则应将样品加热，破坏样品中的其他抑制物质，然后再次检测(或将未经加热和 加热的样品同时检测）。若样品中抑制物浓度等于或大于对照浓度时，试验失败。

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