1聽范围

本标准规定了食品中β聽型溶血性链球菌（Streptococcus）的检验方法。

本标准适用于食品中β聽型溶血性链球菌的检验。

2聽术语和定义

2.1聽β聽型溶血

在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。

2.2聽β聽型溶血性链球菌

能够产生β聽型溶血的化脓（或A聽群）链球菌（Streptococcus聽pyogenes）和无乳（或B聽群）链球菌

（Streptococcus聽agalactiae）。

3聽设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

a)聽恒温培养箱：聽36聽℃±1聽℃；

b)聽冰箱：2聽℃～5聽℃；

c)聽厌氧培养装置；

d)聽天平：感量0.1聽g；

e)聽均质器与配套均质袋；

f)聽显微镜：10聽倍～100聽倍；

g)聽无菌吸管：1聽mL（具0.01聽mL聽刻度）、10聽mL（具0.1聽mL聽刻度）或微量移液器及吸头；

h)聽无菌锥形瓶：容量100聽mL、200聽mL、2聽000聽mL；

i)聽无菌培养皿：直径90聽mm；

j)聽pH聽计或pH聽比色管或精密pH聽试纸；

k)聽水浴装置：36聽℃±1聽℃；

l)聽微生物生化鉴定系统。

4聽培养基和试剂

4.1聽改良胰蛋白胨大豆肉汤（Modified聽tryptone聽soybean聽broth,聽mTSB）：见附录A聽中A.1。

4.2聽哥伦比亚CNA聽血琼脂(Columbia聽CNA聽blood聽agar)：见附录A聽中A.2。

4.3聽哥伦比亚血琼脂(Columbia聽blood聽agar)：见附录A聽中A.3。

4.4聽革兰氏染色液：见附录A聽中A.4。

4.5聽胰蛋白胨大豆肉汤（Tryptone聽soybean聽broth,聽TSB）：见附录A聽中A.5。

4.6聽草酸钾血浆：见附录A聽中A.6。

4.7聽0.25％氯化钙(CaCl2)溶液：见附录A聽中A.7。

4.8聽3％过氧化氢(H2O2)溶液：见附录A聽中A.8。

4.9聽生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。

5聽检验程序

溶血性链球菌检验程序见图1。

聽

6聽操作步骤

6.1聽样品处理及增菌

按无菌操作称取检样25聽g（mL），加入盛有225聽mL聽mTSB聽的均质袋中，用拍击式均质器均质1聽min～2聽min；或加入盛有225聽mL聽mTSB聽的均质杯中，以8000聽r/min～10000聽r/min聽均质1聽min～2聽min。若样品为液态，振荡均匀即可。36聽℃±1聽℃培养18聽h～24聽h。

6.2聽分离

将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA聽血琼脂平板，36聽℃±1聽℃厌氧培养18聽h～24聽h，观察菌落形态。

溶血性链球菌在哥伦比亚CNA聽血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2聽mm～3聽mm，灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β聽型溶血。

6.3聽鉴定

6.3.1聽分纯培养

挑取5聽个（如小于5聽个则全选）可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB聽增菌液，聽36聽℃±1聽℃培养18聽h～24聽h。

6.3.2聽革兰氏染色镜检

挑取可疑菌落染色镜检。β聽型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。

6.3.3聽触酶试验

挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β聽型溶血性链球菌触酶为阴性。

6.3.4聽链激酶试验（选做项目）

吸取草酸钾血浆0.2聽mL聽于0.8聽mL聽灭菌生理盐水中混匀，再加入经36聽℃±1聽℃培养18聽h～24聽h聽的可

疑菌的TSB聽培养液0.5聽mL聽及0.25%氯化钙溶液0.25聽mL，振荡摇匀，置于36聽℃±1聽℃水浴中10聽min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。继续36聽℃±1聽℃培养24聽h，凝固块重新完全

溶解为阳性，不溶解为阴性，β聽型溶血性链球菌为阳性。

6.3.5聽其他检验

使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。

7聽结果与报告

综合以上试验结果，报告每25聽g（mL）检样中检出或未检出溶血性链球菌。

聽

上一篇：实验室中的误差分析

下一篇：保健食品的微生物限量