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000011 范围
本标准本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic聽plate聽count）的测定方法。
聽聽聽聽本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2聽术语和定义
2.1聽菌落总数聽aerobic聽plate聽count
食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）
检样中形成的微生物菌落总数。
3聽设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
3.1聽恒温培养箱：36聽℃±1聽℃，30聽℃±1聽℃。
3.2聽冰箱：2聽℃～5聽℃。
3.3聽恒温水浴箱：46聽℃±1聽℃。
3.4聽天平：感量为0.1聽g。
3.5聽均质器。
3.6聽振荡器。
3.7聽无菌吸管：1聽mL（具0.01聽mL聽刻度）、10聽mL（具0.1聽mL聽刻度）或微量移液器及吸头。
3.8聽无菌锥形瓶：容量250聽mL、500聽mL。
3.9聽无菌培养皿：直径90聽mm。
3.10聽pH聽计或pH聽比色管或精密pH聽试纸。
3.11聽放大镜或/和菌落计数器。
4聽培养基和试剂
4.1聽平板计数琼脂培养基：见附录A聽中A.1。
4.2聽磷酸盐缓冲液：见附录A聽中A.2。
4.3聽无菌生理盐水：见附录A聽中A.3。
5聽检验程序
菌落总数的检验程序见图1。
聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 图1聽菌落总数检验程序
6聽操作步骤
6.1聽样品的稀释
6.1.1聽固体和半固体样品：称取25聽g聽样品置盛有225聽mL聽磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000聽r/min～10000聽r/min聽均质1聽min～2聽min，或放入盛有225聽mL聽稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1聽min～2聽min，制成1:10聽的样品匀液。
6.1.2聽液体样品：以无菌吸管吸取25聽mL聽样品置盛有225聽mL聽磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10聽的样品匀液。
6.1.3聽用1聽mL聽无菌吸管或微量移液器吸取1:10聽样品匀液1聽mL，沿管壁缓慢注于盛有9聽mL聽稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1聽支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100聽的样品匀液。
6.1.4聽按6.1.3聽操作程序，制备10聽倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1聽次1聽mL聽无菌吸管或吸头。
6.1.5聽根据对样品污染状况的估计，选择2聽个～3聽个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10聽倍递增稀释时，吸取1聽mL聽样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1聽mL聽空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6聽及时将15聽mL～20聽mL聽冷却至46聽℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46聽℃±1聽℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2聽培养
6.2.1聽待琼脂凝固后，将平板翻转，36聽℃±1聽℃培养48聽h±2聽h。水产品30聽℃±1聽℃培养72聽h±3聽h。
6.2.2聽如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4聽mL），凝固后翻转平板，按6.2.1聽条件进行培养。
6.3聽菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming聽units，CFU）表示。
6.3.1聽选取菌落数在30聽CFU～300聽CFU聽之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30聽CFU聽的平板记录具体菌落数，大于300聽CFU聽的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.2聽其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3.3聽当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
7聽结果与报告
7.1聽菌落总数的计算方法
7.1.1聽若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
7.1.2聽若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
聽聽聽聽聽……….………………（1）
式中：
N——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。
示例：
|
稀释度 |
1:100（第一稀释度） |
聽1:1000（第二稀释度） |
|
菌落数（CFU） |
232，244聽 |
聽33，35 |
上述数据按7.2.2数字修约后，表示为25000或2.5×104。
7.1.3聽若所有稀释度的平板上菌落数均大于300聽CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4聽若所有稀释度的平板菌落数均小于30聽CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5聽若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1聽乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6聽若所有稀释度的平板菌落数均不在30聽CFU～300聽CFU聽之间，其中一部分小于30聽CFU聽或大于300CFU聽时，则以最接近30聽CFU聽或300聽CFU聽的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.2聽菌落总数的报告
7.2.1聽菌落数小于100聽CFU聽时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
7.2.2聽菌落数大于或等于100聽CFU聽时，第3聽位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2聽位数字，后面用0聽代替位数；也可用10聽的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7.2.3聽若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
7.2.4聽若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
7.2.5聽称重取样以CFU/g聽为单位报告，体积取样以CFU/mL聽为单位报告。
聽
